本方法以L-賴氨酸和L-蛋氨酸為例，對飼料等樣品中十幾種氨基酸的測定方法做一簡要介紹。
一、方法原理
對氨基酸進行柱前衍生后，在254nm波長下，以保留時間定性，采用外標法分析時，需做標準曲線，無需加入正亮氨酸內標物。
二、所需儀器和試劑
儀器：
a.高效液相色譜儀含紫外檢測器
（上海儀電分析儀器有限公司LC220）；
b. 蒸發(fā)回流裝置；
c.萬分之一天平；
d.恒溫水浴鍋；
e.實驗室常用玻璃儀器。
試劑：
a.L-賴氨酸和L-蛋氨酸標準品；
b.甲醇（色譜純）；
c.乙腈（色譜純）；
d.醋酸鈉（分析純）；
e.乙酸（分析純）；
f.正己烷（色譜純）；
g.鹽酸（分析純）；
h.苯酚（分析純）。
三、實驗方法
1.色譜條件
2.試劑配制
2.1 樣品前處理溶液的配制
6mol/L的鹽酸溶液：將鹽酸溶液（36%-38%）與超純水等體積混合，混勻；
0.1mol/L的鹽酸溶液：取8.3mL鹽酸溶液（36%-38%），用水定容到1000mL的容量瓶中，混勻；
0.1%苯酚的6mol/L的鹽酸溶液：移取20μL苯酚，加入20mL6mol/L鹽酸溶液中，混勻。
2.2 混合標準品溶液的配制
準確稱量賴氨酸、蛋氨酸標準標準品配制成2.5μmol/mL的賴氨酸、蛋氨酸標準溶液，用0.1mol/L的鹽酸溶液稀釋成2.5、1.25、0.5、0.25、0.125μmol/mL系列濃度繪制標準曲線，4℃冷藏保存。
2.3 衍生試劑的配制
三乙胺溶液：準確吸取1.4mL三乙胺至10mL容量瓶中，用乙腈定容，搖勻，即得；
異硫氰酸苯酯溶液：準確移取250μL異硫氰酸苯酯至10mL容量瓶中，用乙腈定容，搖勻，即得。
3.樣品處理
3.1 前處理
準確稱取0.1000g樣品于50mL圓底燒瓶中，加入10mL0.1%苯酚溶液溶解，110℃條件下加熱回流24h，反應完成后，冷卻，轉移到100mL容量瓶中，定容。量取50mL溶液蒸干，用水定容至2mL，待衍生。
3.2 衍生反應
準確量取水解后溶液及氨基酸標準品0.2mL，分別置于1.5mL離心管中（內標法需往每支離心管中準確加入正亮氨酸內標50μL），然后分別加入三乙胺乙腈溶液0.1mL和異硫氰酸苯酯乙腈溶液0.1mL，搖勻室溫靜置衍生1小時。衍生結束后分別加入0.4mL正己烷，密封后劇烈振蕩5~10s，靜置分層，取0.2mL下層溶液和0.8mL水混合，過0.45μm有機系針式過濾器，待上機分析。
四、實驗結果
1.標樣譜圖
2.樣品譜圖
3.標準曲線
蛋氨酸標準曲線
y=289746.8125x-8752.5，R=0.9996
賴氨酸標準曲線
y=478883.6875x-426.25，R=0.9998
4.結果計算
備注：
